一、猪瘟检测方法有哪些
猪瘟免疫控制阶段以血清学检测为主，监测净化阶段以病原 学检测为主。
抗体检测用于了解机体免疫功能及猪瘟的免疫保护 水平，病原学检测用于确诊猪瘟病毒野毒感染。血清学检测方法有哪些？应优先选用ELISA方法或其他经试剂比对 和有效验证可靠的方法。
病原学检测方法有哪些？应选用敏感性等于或高 于RT - PCR的方法。为尽可能降低疫苗免疫对RT - PCR的干 扰，建议病原学采样时间在脾淋苗免疫或细胞苗免疫后45天 以上。
检测试剂由养殖场或检测机构自行选购。试剂选择应坚持质 量至上，免疫抗体检测试剂应优先考虑重复性、特异性和敏 感性。
为提高检测结果的科学性和可比性，确保以检测为基础的各 项处理措施的严谨性，检测试剂的选择应以尽可能降低随机误差 为目的，保持试剂的相对稳定，不宜频繁更换。养殖场可参考农 业部净化评估标准的相关内容选择监测净化试剂。
二、猪瘟实验室检验程序是怎样的
猪瘟实验室检验程序如下： 1。
血液学检查猪瘟病猪白细胞显著减少，每立方毫米 8000个以下（正常是1。2万~2。
5万）。白细胞分类可见淋 巴球减少，中性球增多且有核左移现象。
血小板减少到每立 方毫米1万以下（正常是20万~ 50万）。 后期因继发感染， 又可见白细胞增多。
2。兔体交叉免疫试验将病猪淋巴结、脾脏磨碎后以生 理盐水作10倍稀释，对3 ~5只健康家兔作肌肉注射，5毫 升/只，另设3只不注射病料作对照兔，间隔6天后对所有家 兔静脉注射5%猪瘟兔化弱毒（淋巴、脾脏毒），1毫升/只，24 小时以后，每隔6小时测温一次，连续测96小时。
对照组2/ 3出现定型热或轻型热，试验成立。 3。
免疫酶染色试验解剖检查时采取病畜扁桃体、脾、肾、淋巴结作压印片或冰冻切片，标本自然干燥后，在2%戊 二醛或甲醛中固定10分钟，干后置冰箱内待检。 （1）将标本浸人0。
01 %过氧化氢或0。 01 %叠氮钠的℃ris -盐酸缓冲液，室温下作用30分钟。
（2）用pH为7。4，浓度为0。
02摩尔/升的磷酸盐缓冲液 漂洗五次，每次3分钟，片干。 （3）将标本置于湿盒内，滴加1: 10酶标记抗体。
覆盖标 本面上，置37丈作用45分钟。 （或按产品说明书操作） （4）用pH 7。
4、0。 02摩尔/升1 %吐温磷酸盐缓冲液，漂 洗五次，每次2 ~3分钟。
（5）将标本放人DAB (4 -二甲氨基偶氮苯)℃ris -盐酸缓 冲液内，置37℃温箱作用3分钟。 （6）用pH 7。
4、0。 02摩尔/升磷酸盐缓冲液冲洗三至四 次，每次2 ~3分钟，再用无水酒精、二甲苯脱水，封片检査。
（7）用显微镜检查，如细胞浆染成深褐色为阳性；黄色或 无色为阴性。猪瘟兔化弱毒接种的猪组织细胞浆呈微褐色， 与强毒株感染有明显的区别。
4。病毒的分离与增毒试验本试验要用来分离或扩增 病毒数量以提高检疫的敏感性。
（1）将2克扁桃体或脾脏，剪成小块加上无菌砂在乳钵 中碾成匀浆，用汉克氏液或最低要素营养液配成20%的悬 液，加上青霉素（使终浓度为500微克/毫升）和链霉素（使终 浓度为500微克/毫升），室温下放置1小时，3000转/分离心 15分钟取上清液。 （2）将PK 15单层细胞用胰酶消化分散后，800转/分离 心15分钟，用含无牛病毒性腹泻病毒的5%的胎牛血清的最 低要素营养液配成2 x 106个细胞/毫升悬液。
（3）9份上述细胞悬液“（2） ”加上1份病料悬液“（1） ” 接种于转瓶或微量细胞培养瓶，另设不加病料的对照若干瓶 （孔），于接种后1、2、3天，分别将2瓶（孔）培养物及1瓶 （孔）对照用汉克氏液或最低要素营养液洗涤二次，每次5分 钟，用冷丙酮固定10分钟。 （4）进行免疫酶染色或免疫荧光染色，镜检。
5。直接免疫荧光抗体试验 （1）采样群体检疫中，待检可疑猪不少于3例，其中至 少2例为早期患猪，剖杀后或从活体摘取口腭扁桃体。
后期 病猪剖杀后采扁桃体和肾脏。所采组织样品必须新鲜。
（2）送检采样后应尽快送检，如当日不能送出必须冻 后保存，避免组织腐败、自溶。 （3）切片将样品组织块修切出1厘米x 1厘米的面，不 经任何固定处理，直接冻贴于冰冻切片托上（组织块太小时， 如活摘的扁桃体可用冰冻切片机专用的包埋剂或化学浆糊包 埋），进行切片。
切片厚度为5 ~7微米，将切片展贴于0。 8 ~ 1毫米厚的洁净载玻片上。
（4）固定将切片置纯丙酮中固定15分钟，取出后立即 放入0。 01摩尔/升，pH 7。
2的磷酸缓冲盐水中，轻轻漂洗3 ~ 4次取出，自然干燥后尽快进行荧光抗体染色。 （5）荧光抗体染色按工作浓度将猪瘟荧光抗体滴加于 切片表面，置湿盒内于37℃作用30分钟，取出后放入磷酸盐 缓冲液中充分漂洗，再用0。
5摩尔/升，pH 9。0 ~ 9。
5碳酸盐 缓冲甘油封固盖片，尽快镜检，必要时可低温保存待检。 （6）镜检将染色后的切片标本置激发光为蓝紫光或紫 外光的荧光显微镜下观察。
（7）判定于荧光显微镜视野中，见扁桃体隐凹上皮细胞或肾曲小管上皮细胞胞浆内呈现明亮的黄绿色荧光，即可 判定为猪痕病毒感染阳性。
三、请问如何检测猪瘟病毒
猪瘟又称“烂肠瘟”，是由黄病毒科瘟毒病属的猪瘟病毒引起猪的一种急性、发热、接触性传染病。
急性病例呈败血症的临诊症状，剖检可见内脏器官出血、坏死和梗死。慢性经过的病例，主要是纤维素性坏死性肠炎。
常有副伤寒及巴氏杆菌病继发感染。由于贯彻了预防为主的方针，猪瘟基本上得到了控制。
但猪瘟仍是目前危害较大的疫病，在不断总结防治经验的基础上，应该继续做好防疫工作，减少猪瘟造成的损失。 诊断要点 发病特点 在自然情况下，只是猪和野猪感染发病，任何年龄、品种、性别的猪都可以发病；本病在任何季节都可以发生。
不按期进行预防注射的地区，一旦发病，在短期内可造成广泛的流行。发病和死亡都很高。
在常发地区或注射密度不很高的地区，可呈零星散发。 病猪是主要的传染源。
传染途径主要是消化道，也可通过呼吸道、眼结膜及皮肤伤口感染。 猪只的买卖、运输、尸体处理不当，肉品卫生检验不严，兽医卫生措施执行不力，人、动物和昆虫等都可成为间接的传染媒介，促进本病的发生和流行。
通过胎盘传染使子猪患病，成为防治中十分棘手的问题。 临诊症状 猪瘟与发生败血症的猪丹毒、猪肺疫和子猪副伤寒在症状方面很相似，较难分辨，应注意区别诊断。
猪瘟的临诊特点是：体温升高到40。5℃~41℃，呈稽留热，有脓性结膜炎，病初便秘，后腹泻；在病猪耳后、腹部、四肢内侧等毛稀皮薄等处，出现大小不等的红点或红斑，指压不退色；公猪有包皮发炎，用手挤压时，有恶臭混浊液体射出，急性病例，多在1周左右死亡，死亡率可达60%~80%；小猪有神经症状，慢性病例，体温时高时低，食欲时好时坏，便秘与腹泻交替发生，病猪明显消瘦，毛焦臁糜，行走不稳。
一般病程可达20天或以上，死亡居多。 病理剖检变化 急性猪瘟主要呈败血症变化，有诊断价值的变化是：皮肤或皮下有出血点；颚凹、颈部、鼠蹊、内脏淋巴结肿大，呈暗红色，切面周边出血；肾脏色淡，不肿大，有数量不等的小点出血；脾脏边缘梗死；喉头黏膜、会厌软骨、膀胱黏膜、心外膜、肺及肠浆膜黏膜有出血。
慢性病猪特征的变化是盲肠、结肠及回盲口处黏膜上形成扣状溃疡。 实验室检查 常采用的方法有：血清学检查、猪瘟兔化弱毒免体交互免疫试验，生物学试验（非免疫猪种）、荧光抗体试验等。
近些年来，急性猪瘟少发，常有非典型性猪瘟（温和型）病猪出现，其特点是病型温和，病热缓慢，病变局限，呈散发等不典型表现，这就须经实验室检验方可做出可靠的诊断和鉴别。 防治方法 做好平时的预防工作 做好猪瘟的预防注射工作，是防止猪瘟发生的关键措施。
每年采取定期注射和适时补针相结合的办法，用猪瘟兔化弱毒冻干苗，稀释后大小猪一律肌肉注射1毫升。 注射后第4天即可产生免疫力，免疫期可达1年以上。
选择适合本场的免疫程序。 实行自繁自养的办法 若需要从外地购买猪种，运回后还须隔离饲养半个月左右，并进行疫苗注射，进行实验室猪瘟抗原检测阴性，方可混群饲养。
加强集市管理和运输检疫 杜绝病猪在集市出售和收购、运输，以防传播疫病。生猪交易市场、猪库、屠宰场等猪只集中场所，特别应加强兽医卫生管理及检疫措施。
改善饲管 改善饲养管理，搞好圈舍、环境及管理用具的兽医卫生、消毒工作。 发生猪瘟时的紧急措施 目前尚无有效药物治疗猪瘟。
早期诊断，及时采取措施，对控制和消灭猪瘟，减少经济损失有重要意义。 （1）病猪及可疑病猪，立即隔离饲养。
特别是贵重的种猪，在备有抗猪瘟血清的单位，可用于治疗。 （2）对发病猪场及附近尚没有发病的猪只，立即全部用猪瘟兔化弱毒疫苗进行紧急注射，可有效地制止新的病猪出现，缩短流行过程，减少部分损失。
（3）发病猪舍、运动场、饲养管理用具，用2%热碱水或30%草木灰水等进行消毒。 粪尿及垫草等污物，堆积发酵后作肥料利用。
（4）死猪深埋或销毁、化制；急宰病猪的肉，可根据当地条件，同有关人员商定处理办法。
四、猪瘟病的检验方法
发病特点
在自然情况下，只是猪和野猪感染发病，任何年龄、品种、性别的猪都可以发病；本病在任何季节都可以发生。 不按期进行预防注射的地区，一旦发病，在短期内，可造成广泛的流行。发病和死亡都很高。在常发地区或注射密度不很高的地区，可呈零星散发。 病猪是主要的传染来源。传染途径主要是消化道，也可通过呼吸道、眼结膜及皮肤伤口感染。猪只的买卖、运输、尸体处理不当、内品卫生检验不严，兽医卫生措施执行不力，人、动物和昆虫等都可成为间接的传染媒介，促进本病的发生和流行。通过胎盘传染使仔猪患病，成为防制中十分棘手的问题。
临诊症状
猪瘟与发生败血症的猪丹毒、猪肺疫和仔猪副伤寒在症状方面很相似，较准分开，应注意区别诊断。猪瘟的临诊特点是：体温升高到40.5~42C稽留热；有脓性结膜炎；病初便秘，后腹泻；在病猪耳后、腹部、四肢内侧等毛稀皮薄等处，出现大小不等的红点或红斑，指压不褪色；公猪有包皮发炎，用手挤压时，有恶臭混浊液体射出，急性病例，多在1周左右死亡。死亡率可达60﹪~80﹪；小猪有神经症状；慢性猪病，体温时高时低，食欲时好时坏，便秘与腹泻交替发生，病猪明显消瘦、毛焦臁糜，行走不稳。一般病程可达20天或以上，死亡居多。
病理剖检变化
急性猪瘟主要呈现败血症变化，有诊断价值的变化是：皮肤或皮下有出血点；颚凹、颈部、鼠蹊、内脏淋巴结肿大，呈暗红色，切面周边出血；肾脏色淡，不肿大，有数量不等的小点出血；脾脏边缘梗死；喉头粘膜、会厌软骨、膀胱粘膜、心外膜、肺及肠浆膜，粘膜有出血。慢性病猪特征的变化是有盲肠、结肠及回盲口处粘膜上形成扣状溃疡。
